Oligo طہارت کے لیے طہارت کا سامان

1. جیل الیکٹروفورسس کرومیٹوگرافی پیوریفیکیشن
صاف کرنے کے لیے ڈینیچرنگ پولی کریلامائڈ جیل الیکٹروفورسس کرومیٹوگرافی کا استعمال کریں۔منقطع کرنے والا ایجنٹ عام طور پر 4M فارمامائیڈ یا 7M یوریا ہوتا ہے، ایکریلامائیڈ کا ارتکاز 5-15% کے درمیان ہوتا ہے، اور methacrylamide کا تناسب بنیادی طور پر 2-10% کے درمیان ہوتا ہے۔
الیکٹروفورسس کے بعد، الٹرا وایلیٹ روشنی کی شعاع ریزی کے تحت نیوکلیک ایسڈ بینڈ کی پوزیشن کا تعین کرنے کی ضرورت ہے، ہدف نیوکلک ایسڈ پر مشتمل جیل کو کاٹ دیا جاتا ہے، نیوکلک ایسڈ کو توڑا جاتا ہے اور لیچ کیا جاتا ہے، اور پھر لیچنگ محلول کو مرتکز، ڈیسالٹ کیا جاتا ہے۔ مقدار درست اور لائوفائیلائزڈ۔

2. DMT آن، HPLC پیوریفیکیشن
ترکیب کے دوران DMT-On موڈ کا انتخاب کریں، خام پروڈکٹ کو سینٹرفیوج کیا گیا تھا اور اسے کمرے کے درجہ حرارت پر مرتکز کیا گیا تھا تاکہ امائنولیسس کے بعد اضافی امونیا کو دور کیا جا سکے۔
علیحدگی ایک C18 کالم کے ساتھ acetonitrile اور 10% triethylamine-acetic acid (TEAA) کا استعمال کرتے ہوئے کی گئی تھی۔اخراج مکمل ہونے کے بعد، اس کو مرتکز کیا جاتا ہے، اور پھر DMT گروپ کو trifluoroacetic acid کے ساتھ ہٹا دیا جاتا ہے۔نیوٹرلائزیشن کے بعد، کچھ نمکیات اور چھوٹے مالیکیولز کو کٹ آف ٹیوب کے ذریعے ہٹایا جاتا ہے، اور آخر میں ڈیسالٹ کیا جاتا ہے۔

یہ طریقہ اعلی پاکیزگی کے ساتھ ایک مصنوعات حاصل کر سکتا ہے، لیکن یہ depurination کی موجودگی پر توجہ دینا ضروری ہے.

3. ڈی ایم ٹی آف، ایچ پی ایل سی پیوریفیکیشن
ترکیب کے دوران DMT-Off کا انتخاب کریں، اور خام پروڈکٹ کو سنٹر فیوج کیا گیا تھا اور کمرے کے درجہ حرارت پر مرتکز کیا گیا تھا تاکہ امونالیسس کے بعد اضافی امونیا کو دور کیا جا سکے۔
علیحدگی ایک C18 کالم کے ساتھ acetonitrile اور 10% triethylamine-acetic acid کا استعمال کرتے ہوئے پانی میں eluent کے طور پر کیا گیا۔علیحدگی مکمل ہونے اور مقدار طے کرنے کے بعد، ایلی کوٹس کو لائفائلائز کیا جاتا ہے۔

اس طریقہ کار کے لیے علیحدگی کے حالات کی محتاط ایڈجسٹمنٹ کی ضرورت ہوتی ہے، اور یہ نسبتاً خالص ہدف مالیکیول بھی حاصل کر سکتا ہے۔