نیوکلک ایسڈ کی ترکیب کے اصول

نیوکلک ایسڈ کی ترکیب کو ٹھوس فیز سیالک امائیڈ ٹرائگلیسرائیڈ طریقہ استعمال کرتے ہوئے انجام دیا جاتا ہے، جس کے تحت ڈی این اے کا 3′ سرے کو ٹھوس فیز سبسٹریٹ پر متحرک کیا جاتا ہے اور جب تک مطلوبہ ڈی این اے کے ٹکڑے کی ترکیب نہ ہو جائے نیوکلیوٹائڈز 3′ سے 5′ سمت میں شامل کیے جاتے ہیں۔ .یہ ڈی این اے پولیمریز کے استعمال سے ڈی این اے کی ترکیب سے مختلف ہے۔

ترکیب کے دوران پہلے بیس کا 3′ اختتام CPG پر متحرک ہوتا ہے، اگلے بیس کا 5′-OH di-p-tolyl trityl DMT کے ساتھ محفوظ ہوتا ہے، بیس پر موجود امینو گروپ بینزوک ایسڈ اور 3′ سے محفوظ ہوتا ہے۔ -OH پھر ایک امینو فاسفیٹ کمپاؤنڈ کے ساتھ چالو ہوتا ہے۔1 بیس کے 5 5′-OH میں سے 1 اور اگلے بیس کا 3′-OH ایک فاسفائٹ ٹرائگلیسرائڈ بناتا ہے، جسے پھر آئوڈین کے ساتھ فاسفیٹ ٹرائگلیسرائیڈ میں آکسائڈائز کیا جاتا ہے، دوسری بنیاد 5′-OH پر موجود محافظ کو ہٹا دیا جاتا ہے۔ اگلے بیس کے اضافے کے ذریعے ڈائیکلورواسیٹک ایسڈ ڈی ایم سائیکلوں کو شامل کرنا، اور ترکیب کے بعد 5′-OH پر موجود محافظ کو ایک کمزور تیزاب کے ساتھ ہٹا دیا جاتا ہے، ٹکڑا مرتکز امونیم ہائیڈرو آکسائیڈ کے ساتھ ٹھوس رال سے منقطع ہوتا ہے، محافظ کو بیس سے ہٹا دیا جاتا ہے۔ مرتکز امونیم ہائیڈرو آکسائیڈ کے ساتھ ہیٹنگ کے تحت، امونیم ہائیڈرو آکسائیڈ کو ہٹا دیا جاتا ہے، ٹکڑے کو ویکیوم خشک کر دیا جاتا ہے، اور نیوکلک ایسڈ کو مائع کرومیٹوگرافی یا PAGE کے ذریعے پاک کیا جاتا ہے۔

اولیگو ترکیب کے مراحل

بلاک کرنا

دی5 اینڈ ڈی ایم ٹی پروٹیکشن گروپ کو ٹی سی اے سلوشن شامل کرکے ہٹا دیا جاتا ہے۔

چالو کرنا

فعال oligonucleotide monomer انٹرمیڈیٹ بنانے کے لیے ایکٹیویٹر کو اولیگونوکلیوٹائڈ مونومر کے ساتھ ملانا۔

جوڑا

5-ٹرمینل ہائیڈروکسیل گروپ ایک غیر مستحکم فاسفائٹ ٹرائگلیسرائڈ بانڈ بنانے کے لیے ایک اینٹی جنریٹیو کنڈینسیشن ری ایکشن میں فعال اولیگونیوکلیوٹائڈ انٹرمیڈیٹ کے ساتھ رد عمل ظاہر کرتا ہے۔

کیپنگ 

کیپنگ ایجنٹ کا اضافہ اضافی ہائیڈروکسیل گروپوں کے ساتھ ایسٹیلیشن کیپنگ ری ایکشن کرتا ہے جو گاڑھا ہونے والے رد عمل میں شامل نہیں ہوتے ہیں۔

آکسیکرن 

پانی پر مشتمل آئوڈین محلول کا اضافہ آکسیڈیشن کے ذریعے غیر مستحکم فاسفائٹ بانڈز کے ساتھ رد عمل ظاہر کرتا ہے تاکہ مستحکم فاسفورک ایسڈ ٹرائیگلیسرائیڈ بانڈز بن سکے۔

Cyanoethyl Cleavage

ترکیب کے بعد نیوکلک ایسڈ کی مصنوعات، فاسفیٹ ٹرائگلیسرائڈ بانڈ سے سائانو ایتھائل گروپ کو ہٹانے کے لیے DEA محلول کے اضافے کے ساتھ۔

کلیویڈ اینڈ پروٹیکشن

نیوکلک ایسڈ کے ٹکڑوں کو ٹھوس فیز کیریئر سے مرتکز امونیم ہائیڈرو آکسائیڈ محلول شامل کرکے کلیو کیا جاتا ہے اور پھر اڈوں کے ہائیڈروجن بانڈز سے حفاظتی گروپوں کو ہٹانے کے لیے گرم کیا جاتا ہے۔